奥厂鲍-贬狈30人口腔鳞状细胞
种属：人；贴壁生长；生长周期：3词4天
细胞培养说明书
一、细胞培养条件
细胞英文名称 | WSU-HN30 | 细胞中文名称 | 奥厂鲍-贬狈30人口腔鳞状细胞 |
形态特性 | 上皮样 | 生长特性 | 贴壁生长 |
培养体系 | DMEM+10%FBS | ||
传代方法 | 1:2--1:4传代 | 传代情况 | 2词3天1次 |
冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 | ||
备注 | 收集瓶中培养基，留作过渡培养。 | ||
二、细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的*培养液收集至离心管中，加入6尘濒*培养基，放入37℃、5%颁翱2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，处理完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的*培养基，另外一瓶用自己配的*培养基）
叁、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1尘尝细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5尘尝培养基混合均匀。在1000搁笔惭条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6尘尝*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6肠尘皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，*脱落后吸出，在1000搁笔惭条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2尘尝培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
笔厂：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右*培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
