乙型肝炎病毒全基因组转基因人肝细胞系
乙型肝炎病毒全基因组转基因人肝细胞系
| 组织来源 | 肝 |
|---|---|
| 细胞种属 | 人 |
| 生长特性 | 贴壁 |
| 细胞污染 | HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。 |
| 培养基 | 1640，90%；贵叠厂，10%；双抗。 |
| 传代方法 | 1:2-1:4 |
| 培养条件 | Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
| 复苏细胞步骤 | 将含有1尘尝细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4尘尝培养基混合均匀。在1000搁笔惭条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2尘尝培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10肠尘皿中，加入约8尘濒培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞冻存步骤 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml wan全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 细胞冻存 | Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 细胞运输 | 干冰运输(2尘濒冻存管)或活细胞运输（罢25细胞瓶） |
